GBT 43459-2023洁净室及受控环境中细胞培养操作技术规范

国家市场监督管理总局与国家标准化管理委员会联合发布的GB/T 43459-2023《洁净室及受控环境中细胞培养操作技术规范》，于2023年12月28日正式公布，并于2024年7月1日起实施。该标准由全国洁净室及相关受控环境标准化技术委员会归口管理，是中国首个针对哺乳动物细胞培养在洁净环境中全流程操作的技术规范，填补了细胞治疗、生物制药等领域在标准化操作层面的空白。

核心内容与技术框架

该标准围绕细胞培养的操作安全性、环境可控性及结果可追溯性三大维度，构建了全流程技术体系：

1. 环境参数动态管控：
   要求洁净室及受控环境实时监测悬浮粒子（≥0.5μm/5.0μm）、沉降菌/浮游菌浓度、压差梯度（5-15Pa）、温湿度（±1℃精度）等核心参数，确保符合ISO 14644-1中5-7级洁净度要求。同时规范了环境验证频率（如每日静态监测、工艺过程动态监测）。

2. 关键操作流程标准化：
   覆盖细胞传代、冻存、复苏、培养基更换等关键环节，明确无菌操作技术细则。例如：

   • 冻存液配制需在A级洁净工作台内完成，冻存管转移须使用双重密封容器；

   • 细胞复苏后存活率验证要求采用台盼蓝染色法（存活率≥90%）；

   • 交叉污染防控强制要求不同细胞系分时分区操作。

3. 污染风险分级防控：
   针对微生物污染（细菌、真菌、支原体）及化学污染（内毒素、培养基残留），设立三级警戒限值（行动限、警戒限、标准限），并规定消毒剂轮换策略（如季铵盐类与过氧化氢交替使用）。

行业痛点与技术创新

相较于传统经验式操作，本标准首次实现：

• 操作与设计的协同性：与配套标准GB/T 42398-2023《细胞培养洁净室设计技术规范》形成“设计-操作”闭环，要求操作流程匹配洁净室的压差梯度布局、人流物流通道设计79。

• 动态数据驱动决策：引入实时监测数据记录（如粒子计数器、浮游菌采样器日志），要求操作偏差触发自动报警并暂停流程，确保异常可追溯。

• 细胞活性量化评价：新增细胞形态学、代谢活性（MTT法）、功能标记物表达率等证实方法，替代主观经验判断。

实施价值与行业影响

1. 降低产品风险：
   规范化的无菌操作与污染防控可显著减少细胞制剂染菌率（研究显示GMP环境操作失误导致染菌率高达15%），保障干细胞药物、CAR-T细胞疗法的安全性与有效性。

2. 加速产业化进程：
   为细胞治疗企业提供申报药监部门（如NMPA、FDA）的合规依据，缩短审计周期。例如，标准中“交叉污染防控条款”直接对应《细胞治疗产品生产质量管理指南》附录要求。

3. 成本优化：
   通过预防性操作规范减少批次报废损失，据行业测算，符合标准的洁净室操作可降低细胞制备成本约12%-18%。

GB/T 43459-2023不仅是技术操作的规范，更是推动中国细胞治疗产业从实验室研究向规模化生产转型的基石。随着标准实施，企业需重点升级洁净环境监测系统、重构操作SOP并建立人员培训认证体系，以抢占再生医学领域的竞争制高点。

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